2光子蛍光顕微鏡法 (2PF)

1990年、コーネル大学の研究者は、ここでは2光子顕微鏡と呼ばれるレーザー走査顕微鏡による2光子励起の使用を実証しました。2光子蛍光顕微鏡では、図1に示すように、2つの光子が同時に吸収され、蛍光分子に高エネルギーの電子遷移を引き起こします。詳細については、2光子蛍光顕微鏡法をご参照ください。

2光子蛍光用の顕微鏡システムの概略図を図2に示します。レーザーは試料面の狭いスポットに焦点を合わせ、サンプル上でラスターでスキャンされます。レーザーの焦点がサンプル内の蛍光分子と重なると、蛍光は小さな焦点ボリュームで選択的に生成され、光検出器によって検出されます。信号は空間的にマッピングされ、データ取得コンピューターによって画像の個々のピクセルを生成します。共焦点顕微鏡と2光子蛍光顕微鏡の主な違いは、レーザーと蛍光検出パスです。2光子蛍光顕微鏡では、検出器のピンホールが不要なため、対物レンズによって収集されたすべての蛍光光子が有用な信号を構成します。